动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程 微量肉汤稀释法NYT4142-2022.pdf

2022?07?11发布2022?10?01实施动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程微量肉汤稀释法22中华人民共和国农业行业标准备案号：XXXX-XXXX67.120.10CCS X41422022?Technical code of practice of antimicrobial susceptibility tests for bacteria isolatedfrom animalsBroth microdilution method中华人民共和国农业农村部发 布41422022NY?/T41422022中国农业出版社出版购买正版纸质文本请联系中国农业出版社标准质量分社冀编辑2电话?前?言本文件按照?标准化工作导则?第?部分?标准化文件的结构和起草规则?的规定起草?请注意本文件的某些内容可能涉及专利?本文件的发布机构不承担识别专利的责任?本文件由农业农村部畜牧兽医局提出?本文件由全国兽药残留与耐药性控制专家委员会归口?本文件起草单位?中国兽医药品监察所?上海市动物疫病预防控制中心?本文件主要起草人?张纯萍?姜芹?赵琪?张文刚?宋立?孙冰清?崔明全?商军?徐士新?顾欣?王鹤佳?动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程微量肉汤稀释法?范围本文件规定了动物源细菌对抗菌药物敏感性测试微量肉汤稀释法的操作步骤?结果判读?质量控制?记录及生物安全等技术要求?本文件适用于采用微量肉汤稀释法测定抗菌药物对动物源细菌的最小抑菌浓度?规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款?其中?注日期的引用文件?仅该日期对应的版本适用于本文件?不注日期的引用文件?其最新版本?包括所有的修改单?适用于本文件?分析实验室用水规格和试验方法?实验室?生物安全通用要求?术语和定义下列术语和定义适用于本文件?最小抑菌浓度?能抑制肉眼可见的细菌生长的最低抗菌药物浓度?菌落形成单位?在琼脂平板上经过一定温度和时间培养后形成的每一个菌落?试剂或材料?要求除另有规定外?所有试剂均为分析纯?水为符合?规定的三级水?培养基或缓冲液按附录?配制或用商品化产品?试剂?氯化钠?氯化钙?氯化镁?抗菌药物?应选择标准品或对照品?具体种类见附录?的表?和表?溶液制备?无菌生理盐水?取氯化钠?加水适量使溶解并稀释至?灭菌?抗菌药物非水溶剂和稀释剂?按照附录?中表?的规定执行?培养基制备?阳离子调节?肉汤?按照?的规定执行?营养琼脂?按照?的规定执行?哥伦比亚血琼脂?按照?的规定执行?琼脂?按照?的规定执行?质控菌株?大肠埃希菌?用作肠杆菌科的质控?粪肠球菌?用作肠球菌属的质控?铜绿假单胞菌?用作铜绿假单胞菌的质控?金黄色葡萄球菌?用作葡萄球菌属的质控?空肠弯曲杆菌?用作弯曲杆菌属的质控?肺炎链球菌?用作链球菌属和巴氏杆菌属的质控?材料?麦氏单位?标准比浊液?仪器设备?计?测量范围?精度?单位?恒温培养箱?微需氧培养箱或微需氧产气袋?二级生物安全柜?超低温冰箱?或以下?微量移液器?比浊仪?精确度?麦氏浊度单位?分析天平?感量?和?全自动药敏判读系统?操作步骤?抗菌药物溶液制备?储备液取抗菌药物适量?精密称定?加水或其他适宜溶剂溶解并稀释?按照表?的规定执行?至浓度至少为?如?或为最高测试浓度的?倍以上?或以下?保存?有效期?个月?临用前从冰箱取出?静置至室温?避免反复冻融?工作液取储备液用?稀释至一定浓度后?倍比稀释至测试系列浓度?工作液浓度宜覆盖敏感性折点值?质控菌质控范围?药敏板的制备取无菌?孔板?设阳性对照和阴性对照各?孔?分别加入无菌?其余孔中加入系列抗菌药物工作液各?备用?药敏板应当天使用?或立即置?或以下?保存备用?临用前从冰箱中取出?静置至室温?避免反复冻融?使用商品化药敏检测试剂盒时?按照其使用说明进行操作?菌悬液的制备?初始菌悬液?两种方法任选其一?直接菌悬液法?取质控菌?测试菌单菌落?分别置于无菌生理盐水或无菌?中?用比浊仪或?麦氏单位标准比浊液调菌液浓度至?麦氏单位?相当于?生长法?取质控菌?测试菌单菌落?分别置于加有?无菌?的试管中?培养?将培养好的菌液用无菌生理盐水或无菌?调菌液浓度至?麦氏单位?相?当于?适用于菌落不易直接乳化而不能获得浓度均一菌悬液的细菌?工作菌悬液初始菌悬液用无菌?进行?稀释?即为工作菌悬液?制备?内完成接种?接种取药敏板?阴性对照孔加入无菌?其余孔中加入工作菌悬液各?最终菌浓度约为?混匀?培养接种后的药敏板置于?培养?常见苛养菌的培养基?培养液及培养条件按照附录?的规定执行?结果判读?阴性对照和阳性对照取培养后的药敏板?在黑色背景下观察?或选用全自动药敏判读系统?阴性对照应无菌生长?孔内液体未见浑浊?阳性对照有菌生长?孔内液体浑浊或形成菌团?菌斑?否则?本次试验结果无效?质控菌株?在间接无反射光的黑色背景下