药用植物细胞培养技术规程TCACM 1481-2023.pdf

ICS 11.120.99 CCS B 38 团体标准 T/CACM 14812023 药用植物细胞培养技术规程 Technical regulation of medicinal plant cell culture 2023-04-04 发布 2023-04-04 实施 中 华 中 医 药 学 会 发 布 T/CACM 14812023 I 目 次 前言.II 引言.III 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 工作区条件.2 4.1 概述.2 4.2 洗涤间.2 4.3 消毒间.2 4.4 培养基制备间.2 4.5 接种间.2 4.6 培养间.2 4.7 细胞保存间.2 5 清洗与灭菌.3 5.1 清洗.3 5.2 灭菌.3 6 试剂与培养基.3 6.1 水.3 6.2 消毒灭菌剂.4 6.3 培养基.4 6.4 培养基的配制.4 7 培养与保存.5 7.1 外植体的选择与处理.5 7.2 接种.5 7.3 药用植物细胞的初代培养.6 7.4 药用植物细胞的继代培养.6 7.5 药用植物细胞的保存.6 T/CACM 14812023 II 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由珍稀濒危药用植物国家地方联合工程研究中心提出。本文件由中华中医药学会归口。本文件起草单位：珍稀濒危药用植物国家地方联合工程研究中心、中国中医科学院中药资源中心、大连普瑞康生物技术有限公司、广西药用植物园、安徽中医药大学、大连源盛泰医疗投资股份有限公司、北京同仁堂健康药业有限公司、浙江中医药大学。本文件主要起草人：黄璐琦、刘汉石、袁媛、刘雅萍、秦双双、刘禹、李晓琳、谢冬梅、陈梓、金银兵、赵玉洋、张显林、周骏辉、吴俊罡、赵乔、黄利、张宏、朱爱松。T/CACM 14812023 III 引 言 利用生物技术保护模式获取中药材补充资源，是解决我国珍稀濒危药用植物资源日趋枯竭、市场需求却日益强劲这一矛盾的有效途径。药用植物高产稳定细胞是指在人工控制条件下高密度大量培养的药用植物细胞，具有成分清楚、功效明确、质量稳定、生产成本低、生产周期短等特点。作为一种生物技术补充资源，药用植物高产稳定细胞已广泛应用于科学研究，并成为新食品、保健品、化妆品等原料，形成以药用植物细胞原料为基础的大健康产业。本文件旨在建立药用植物细胞培养技术规程，对于指导和规范科学研究和生产中的药用植物细胞培养具有重要意义。T/CACM 14812023 1 药用植物细胞培养技术规程 1 范围 本文件规定了药用植物细胞培养过程中工作区条件、清洗与灭菌、试剂与培养基、培养与保存的内容。本文件适用于苔藓植物、蕨类植物、种子植物中的药用植物细胞的培养。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 LY/T 18822010 林木组织培养育苗技术规程 DB33/T 7522022 植物种苗组培快繁技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 药用植物细胞培养 medicinal plant cell culture 在离体条件下对药用植物的器官、组织、细胞、原生质体等进行培养使其增殖的技术。3.2 外植体 explant 药用植物细胞培养中用于离体培养材料的器官、组织、细胞、原生质体等。3.3 培养基 medium 根据植物营养原理和植物细胞培养技术要求，由不同营养物质组合的人工配制的营养基质。3.4 接种 inoculation 在无菌条件下，将经过表面消毒处理的外植体切割后转接到培养基上的过程。T/CACM 14812023 2 3.5 初代培养 explant culture 外植体经表面消毒后接种于培养基上，细胞开始增殖、脱分化，获得最初培养材料的过程。3.6 继代培养 subculture 外植体经初代培养后，经过若干次转接于新培养基上，并持续培养多代的过程。4 工作区条件 4.1 概述 工作区一般由洗涤间、消毒间、培养基制备间、缓冲间、接种间、培养间和细胞保存间组成。4.2 洗涤间 配置水槽、工作台等，地面应防水、防滑，水槽处墙面应防水。4.3 消毒间 配置排风及灭火设备，配备高压蒸汽消毒器、鼓风干燥箱等设备。工作规模较小或空间有限时，洗涤间和消毒间可合并。4.4 培养基制备间 应有适宜空间及配套工作台，配置存放化学试剂的药品柜、危险品柜及存放培养、接种器皿的器械柜，并配备电子天平、超纯水装