粮油检测 粮食中T-2毒素的测定 时间分辨荧光免疫层析快速定量法LST6147-2023.pdf

I C S6 7.0 6 0C C SB2 0中华人民共和国粮食行业标准L S/T6 1 4 72 0 2 3粮油检测 粮食中T-2毒素的测定时间分辨荧光免疫层析快速定量法I n s p e c t i o no f g r a i na n do i l sD e t e r m i n a t i o no fT-2t o x i n i nc e r e a l sT i m e-r e s o l v e df l u o r e s c e n t i mm u n o c h r o m a t o g r a p h i cm e t h o d2 0 2 3-1 1-1 4发布2 0 2 4-0 5-1 4实施国家粮食和物资储备局发 布中 国 标 准 出 版 社出 版前 言 本文件按照G B/T1.12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由国家粮食和物资储备局提出。本文件由全国粮油标准化技术委员会(S A C/T C2 7 0)归口。本文件起草单位:江南大学、深圳市易瑞生物技术股份有限公司、深圳市绿诗源生物技术有限公司、江苏省粮油质量监测中心、南京微测生物科技有限公司、国家粮食和物资储备局科学研究院。本文件主要起草人:胥传来、郭玲玲、李爱科、匡华、刘丽强、王忠兴、徐丽广、付辉、黄永健、张鑫、蒋永青、黄斌、张金超、黄熙荣、黄伟。L S/T6 1 4 72 0 2 3粮油检测 粮食中T-2毒素的测定时间分辨荧光免疫层析快速定量法1 范围本文件规定了时间分辨荧光免疫层析快速定量法测定粮食中T-2毒素含量的试剂及材料、仪器设备、样品、样品测定、结果表述和重复性。本文件适用于玉米、小麦、稻米等粮食中T-2毒素的快速定量检测。本文件的方法检出限为3.0g/k g,定量限为5.0g/k g。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B/T6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 原理试样中T-2毒素与含铕-时间分辨荧光微球标记的特异性抗体发生结合后,抑制了层析过程中抗体与检测线上T-2毒素-蛋白偶联物的免疫反应,使检测线上荧光强度降低,通过荧光强度变化对应的荧光分析仪内置曲线自动计算出试样中T-2毒素的含量。5 试剂及材料除另有说明外,所用试剂均为分析纯,实验室用水应符合G B/T6 6 8 2中三级水的要求。5.1 试剂5.1.1 T-2毒素(C A S:2 1 2 5 9-2 0-1):纯度9 8%。5.1.2 甲醇。5.1.3 十水硼酸钠(N a2B4O71 0 H2O)。5.1.4 硼酸(H3B O3)。5.1.5 吐温-2 0(C5 8H1 1 4O2 6)。5.2 T-2毒素荧光免疫层析卡(以下简称“检测卡”)性能应满足附录A的要求。不同品牌不同批次的检测卡使用前应按照附录A进行性能测定。1L S/T6 1 4 72 0 2 35.3 溶液配制5.3.1 样本提取液取5 0.0m L的甲醇(5.1.2)加水5 0.0m L,混匀,现用现配。由检测卡配套提供,或根据产品说明书配制。5.3.2 样品稀释液称取1 9.0 7g十水硼酸钠(5.1.3)、1 2.3 7g硼酸(5.1.4)、5 0g吐温-2 0(5.1.5),用水溶解定容至10 0 0m L,室温保存,有效期6个月。由检测卡配套提供,或根据产品说明书配制。5.4 标准溶液配制称取1.0m g标准品T-2毒素(5.1.1),精确至0.0 1m g,用甲醇(5.1.2)溶解定容至1 0.0m L。此标准溶液中T-2毒素的含量为0.1 0m g/m L,-2 0条件下保存,有效期6个月。6 仪器设备6.1 天平:感量0.0 1g。6.2 粉碎机:电机转速10 0 0r/m i n。6.3 检验筛:4 0目。6.4 离心管:1.5m L、5 0m L。6.5 涡旋振荡器。6.6 离心机:转速50 0 0r/m i n。6.7 孵育器:3 73。6.8 时间分辨荧光分析仪:激发波长为3 6 5n m5n m,发射波长为6 1 5n m5n m。6.9 移液枪:2 0 0L、10 0 0L。7 样品7.1 试样制备随机取样5 0 0g,粉碎后使其全部通过检验筛,充分混匀后,放入聚乙烯瓶或袋中。7.2 试样储存将试样按照测试和备用分别存放,置于-1 8及以下条件下保存。8 试验步骤8.1 试样处理准确称取5.0g样品,精确至0.0 1g