粮油检验 粮食中霉菌计数 荧光快速检测法LST6146-2023.pdf

I C S6 7.0 6 0C C SX0 4中华人民共和国粮食行业标准L S/T6 1 4 62 0 2 3粮油检验 粮食中霉菌计数荧光快速检测法I n s p e c t i o no f g r a i na n do i l sE n u m e r a t i o no fm o l d s i ng r a i nF l u o r e s c e n c e r a p i dd e t e c t i o nm e t h o d2 0 2 3-1 1-1 4发布2 0 2 4-0 5-1 4实施国家粮食和物资储备局发 布中 国 标 准 出 版 社出 版前 言 本文件按照G B/T1.12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由国家粮食和物资储备局提出。本文件由全国粮油标准化技术委员会(S A C/T C2 7 0)归口。本文件起草单位:国家粮食和物资储备局科学研究院、国家粮食和物资储备局标准质量中心、山东省粮油检测中心、中国储备粮管理集团有限公司仓储管理部、河北省粮油质量检测和信息服务中心、天津海关动植物与食品检测中心、吉林省粮油卫生检验监测站、广东省粮食和物资储备保障中心、安徽省粮油产品质量监督检测站、云南省粮油科学研究院(云南省粮油产品质量监督检验测试中心)、山西省检验检测中心(山西省标准计量技术研究院)、陕西省粮食质量安全中心、青岛元信检测技术有限公司、天祥(天津)质量技术服务有限公司青岛分公司、农业农村部食物与营养发展研究所。本文件主要起草人:崔华、王松雪、谢刚、王培、李克强、郭玉婷、王静、檀军锋、李森、张宏伟、赵良娟、张月、张建桥、石家源、王亚军、朱启思、胡斌、刘付英、王学政、王友凯、王丽华、宋泽伟、赵荔、高璐斐、韩娟。L S/T6 1 4 62 0 2 3粮油检验 粮食中霉菌计数荧光快速检测法1 范围本文件规定了粮食中霉菌计数荧光快速检测法的试剂与材料、仪器与设备、操作步骤、结果计算与报告、废弃物处理。本文件适用于粮食及其制品中霉菌的计数。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B/T6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法G B1 9 4 8 9 实验室 生物安全通用要求3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1霉菌计数 e n u m e r a t i o no fm o l d s样品经过处理,在一定条件下经培养后所得1g样品中霉菌的数量。3.2菌落形成单位 c o l o n y-f o r m i n gu n i t;C F U由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落。4 原理样品稀释液通过滤膜后,霉菌被截留在滤膜表面,经培养基放大培养后,荧光试剂中不发光的酶底物进入霉菌体内并发生酶解反应,底物将发光基团释放到霉菌的细胞质中,发光基团在细胞内累积后,霉菌菌落在激发光线作用下被激发而显示荧光。5 试剂与材料除另有说明外,试验用水应符合G B/T6 6 8 2中三级水的规格。5.1 改良霉菌培养基:见附录A中A.1。5.2 生理盐水:见A.2。5.3 荧光显色液:见A.3。5.4 无菌均质袋或锥形瓶:容量2 5 0m L。1L S/T6 1 4 62 0 2 35.5 广口锥形瓶:容量1L或5 0 0m L。5.6 试管:1 8mm1 8 0mm。5.7 无菌吸管:1m L(具0.0 1m L刻度)、1 0m L(具0.1m L刻度)或移液器及枪头。5.8 无菌镊子。5.9 无菌培养皿:直径9 0mm。5.1 0 无菌疏水栅格滤膜:孔径0.4 5m,直径4 7mm。5.1 1 带垫片培养皿:直径5 0mm。6 仪器与设备6.1 谷物粉碎机:电机转速10 0 0r/m i n,粉碎粒径1mm。6.2 天平:感量0.1g。6.3 荧光检测仪:光源激发波长范围包含4 9 0n m,并含有截止波长为4 2 0n m的光学滤镜。6.4 拍击式均质器或振荡器。6.5 涡旋混合器。6.6 过滤器:5 0m L滤杯体积2 5 0m L。6.7 真空泵。6.8 培养箱:2 81。6.9 灭菌锅。7 操作步骤7.1 样品制备7.1.1 将样品用谷物粉碎机磨细至粒径小于1mm(全部通过1mm孔径的试验筛),充分混匀。7.1.2 准确称取2 5g粉碎试样(精确至0.1g),置于含有2 2 5m L无菌生理盐水(5.2)的锥形瓶(5.4)中,盖好瓶塞,放置到振荡器(6.4)中振荡3 0m i n(