微生物实验室生物安全操作规程.docx

微生物实验室生物安全操作规程一、目的制订本规则，保证实验室工作人员的健康安全、实验设备安全卫生以及防止对外界环境造成污染。二、适用范围适用于所有进入微生物实验室人员。实验室工作人员必需严格遵守安全操作规程。三、安全操作规程：1.员工安全操作规程1.1 实验室入口处须贴上生物危险标志，注明危险因子、生物安全级别、负责人姓名和电话、进入实验室的特殊要求及离开实验室的程序。1.2 禁止非工作人员进入实验室。参观实验室等特殊情况须经实验室负责人批准后方可进入，做好卫生防护，并在有关人员陪同下方可进入，同时注意做好环境维护及保密工作。1.3 进行感染性实验时，禁止他人进入实验室，或必须经实验室负责人同意后方可进入。免疫耐受或正在使用免疫抑制剂的工作人员必须经实验室负责人同意方可在实验室工作。1.4 接触微生物或含有微生物的物品后，脱掉手套后和离开实验室前要洗手。1.5 禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及储存食物。1.6 尽量以移液器吸取液体，禁止口吸。1.7 实验过程中，严格按有关操作规程操作，降低溅出和气溶胶的产生。1.8 每天至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要随时用 75%乙醇或巴氏消毒液消毒。1.9 实验人员在配制培养基过程中，需尽量避免接触性或吸入性危害，特别是配制 TTB 和碘液等对人体有害的培养基或试剂时，要穿戴工作服、口罩和手套，并在通风橱中进行。1.10 工作人员应接受必要的免疫接种和检测(如乙型肝炎疫苗、卡介苗等)。工作人员要接受有关的潜在危险知识的培训，掌握预防暴露以及暴露后的处理程序。每年要接受一次最新的培训。人员暴露于感染性物质时，及时向实验室负责人汇报，并记录事故经过和处理方案。1.11 禁止将无关动物带入实验室。2.无菌室安全操作规程2.1 无菌培养室每天都要用 0.2%的新洁尔灭拖洗地面一次(拖布专用)， 紫外线照射消毒 30min 以上，超净工作台台面每次实验前要用 75酒精擦洗。然后紫外线消毒 30min。操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用 75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。2.2 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。2.3 无菌室应备有工作浓度的消毒液， 如 5的甲酚溶液， 75的酒精， 0.1的新洁尔灭溶液，等等。2.4 无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。2.5 需要带入无菌室使用的器械、平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。2.6 工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用 75% 乙醇等消毒剂再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。2.7 无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌 30 分钟，灭菌后通无菌风至少 30min 以上人员才能进入。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌 30 分钟。2.8 供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用 75的酒精棉球消毒外表面。2.9 每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。2.10 吸取菌液时，必须用移液器吸取，切勿直接用口接触吸管。2.11 接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。2.12 带有菌液的吸管， 试管， 培养皿等器皿应浸泡在盛有 5%来苏尔溶液或巴氏消毒液的消毒桶内消毒，24 小时后取出冲洗。2.13 如有菌液洒在桌上或地上， 应立即用 5%石碳酸溶液或 3的来苏尔倾覆在被污染处至少 30 分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。2.14 凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。2.15 无菌室应每月检查菌落数。 在层流无菌风开启的状态下， 取内径 90mm的无菌营养琼脂平板 5 个，分别放置无菌室四周及中央位置，开盖暴露 30分钟后，倒置于 36培养箱培养 48 小时，取出检查。100 级洁净区平板杂菌数平均不得超过 1 个菌落/平皿，10000 级洁净室平均不得超过 3 个菌落/平皿。如超过限度，应用臭氧发生器等对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。3.压力蒸汽灭菌器的安全使用操作程序：3.1 堆放：将需灭菌的物品予以妥善包扎，各包之间留有空隙，依次堆放在灭菌桶的筛板上，以蒸汽穿透，提高灭菌效果。需灭菌物品外需黏上高压指示胶带以检验灭菌温度是否达到要求。3.2 加水： 在锅体内注入生活用水， 水位一定要超过电热管 2 厘米以上 （不宜过多） ；连续使用时，每次操作前，必须补足上述水位，以免烧坏电热管和意外发生。3.3 密封：在每次使用高压锅前，都必须认真检查高压锅的出气伐和安全阀，确保其状态完好，如有故障，在故障排除之前不得使用高压灭菌锅。把堆放