规模化奶牛场布鲁氏菌病净化技术规范DB13T5625-2022.pdf

ICS 65.020.30 CCS B 41 13 河北省地方标准 DB 13/T 56252022 规模化奶牛场布鲁氏菌病净化技术规范 2022-08-10 发布 2022-09-10 实施 河北省市场监督管理局 发 布 DB 13/T 56252022 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由河北省农业农村厅提出。本文件起草单位：河北省畜牧兽医研究所、河北省动物疫病预防控制中心、唐山市动物疫病预防控 制中心。本文件主要起草人：王晓芳、邵丽玮、徐华、郭建军、马宏伟、刘天驹、顾文源、符乐、孙凤莉、薄玉琨、李惠敬、邳明伟、刘嫣然、冯曼、刘泽、崔雪霞、李彦龙、张晓利。DB 13/T 56252022 1 规模化奶牛场布鲁氏菌病净化技术规范 1 范围 本文件规定了规模化奶牛场布鲁氏菌病的实验室检测、净化检测、净化标准和净化维持等技术要求。本文件适用于规模化奶牛场布鲁氏菌病的净化，其他类型的奶牛场布鲁氏菌病净化可参考执行。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 18646 动物布鲁氏菌病诊断技术 NY/T 1467 奶牛布鲁氏菌病PCR诊断技术 NY/T 5049 无公害食品 奶牛饲养管理准则 畜禽标识与养殖档案管理办法（2006年农业部令第67号）布鲁氏菌病防治技术规范（农医发200712号）病死及病害动物无害化处理技术规范（农医发201725号）3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 实验室检测 血清学 4.1.1 血清 4.1.1.1 样品要求 血清来自布鲁氏菌病非免疫奶牛，使用A19疫苗皮下注射接种超过18个月或使用S2疫苗口腔喷服接种超过6个月的奶牛。4.1.1.2 检测方法 虎红平板凝集试验（RBT），试管凝集试验（SAT），间接酶联免疫吸附试验（i-ELISA），竞争酶联免疫吸附试验（c-ELISA），补体结合试验（CFT），按GB/T 18646-2018执行。对于不符合4.1.1.1要求的血清，采用琼脂凝胶免疫扩散试验（NH-GD）进行鉴别检测，方法见附录A。4.1.2 乳样 4.1.2.1 样品要求 新鲜全乳或混合乳来自布鲁氏菌病非免疫奶牛，使用A19疫苗皮下注射超过18个月或使用S2疫苗口腔喷服接种超过6个月的奶牛，不得为初乳、脱脂乳、煮沸过的乳、冻结乳、腐败乳、酸化乳、乳房炎及其他乳房疾病患病牛的乳样。4.1.2.2 检测方法 采用全乳环状试验（MRT），按GB/T 18646执行。病原学 DB 13/T 56252022 2 4.2.1 样品要求 流产胎儿可无菌采集胎衣、羊水、肝、脾、淋巴结、胃内容物等；流产母牛可无菌采集乳汁、阴道分泌物等。采样过程应当采取措施防止病原微生物扩散。4.2.2 检测方法 采用聚合酶链式反应（PCR），按NY/T 1467执行。感染判定 4.3.1 对临床健康奶牛，采用 RBT 或 i-ELISA、MRT 中任一方法，检测结果阳性的判为疑似感染阳性。4.3.2 对临床健康奶牛，采用 SAT、c-ELISA、CFT 中任一方法检测结果阳性的，判为感染阳性。4.3.3 对免疫布鲁氏菌病疫苗未超过 4.1.1.1 中接种时间的临床健康奶牛，采用 NH-GD 检测结果阳性的，判为感染阳性。4.3.4 对流产母牛、流产胎儿，采用 4.2.2 检测结果阳性的，判定为病例。5 净化检测 本底调查 按照预期感染率3%、置信度95%确定随机抽样数量，并根据泌乳牛、干乳牛、后备牛存栏数量按比例分配，覆盖到每个栋舍。技术路线 5.2.1 牛群布鲁氏菌病感染率2%，循环检测，隔离淘汰患病牛或感染阳性牛。5.2.2 牛群布鲁氏菌病感染率2%，可接种布鲁氏菌疫苗，跟踪检测感染率2%后停止免疫，并按5.2.1 执行。方法组合 5.3.1 串联检测 对于感染率2%的奶牛群或在净化初期，采用 i-ELISA 或 RBT、MRT 方法检测初筛，结果阳性的样品采用 c-ELISA 或 SAT、CFT 方法检测确诊。推荐 i-ELISA 初筛、c-ELISA 确诊组合。5.3.2 并联检测 对于感染率2%的奶牛群或在净化后期，采用 i-ELISA、RBT、MRT、c-ELISA 等两种以上方法平行检测，任一方法检测结果阳性或可疑视为感染阳性牛。检测频率 5.4.1 外引牛 引入前在输出地检测一次，引入后隔离 45 d60 d，混群前再检测一次。5.4.2 流产牛 对流产母牛进行血清学检测，对流产物进行病原学检测。5.4.3 感染牛群 每隔 24 个月普检一次，