食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验GB 4789.4-2024.pdf
中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B4 7 8 9.42 0 2 4食品安全国家标准食品微生物学检验 沙门氏菌检验 2 0 2 4-0 2-0 8发布2 0 2 4-0 8-0 8实施中华人民共和国国家卫生健康委员会国 家 市 场 监 督 管 理 总 局发 布前 言 本标准代替G B4 7 8 9.42 0 1 6 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验。本标准与G B4 7 8 9.42 0 1 6相比,主要变化如下:修改了设备和材料、培养基和试剂;修改了检验程序和操作步骤;修改了附录A和附录B。G B4 7 8 9.42 0 2 4食品安全国家标准食品微生物学检验 沙门氏菌检验1 范围本标准规定了食品中沙门氏菌(S a l m o n e l l a)的检验方法。本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下。2.1 冰箱:28。2.2 恒温培养箱:3 61,恒温装置:4 21、4 82。2.3 均质器。2.4 振荡器。2.5 天平:感量0.1g。2.6 无菌锥形瓶:容量5 0 0m L、2 5 0m L。2.7 无菌量筒:容量5 0m L。2.8 无菌均质杯、无菌均质袋。2.9 无菌广口瓶:容量5 0 0m L。2.1 0 无菌吸管:1m L(具0.0 1m L刻度)、1 0m L(具0.1m L刻度)或微量移液器及吸头。2.1 1 无菌培养皿:直径6 0mm、9 0mm。2.1 2 无菌试管:1 0mm7 5mm、1 5mm1 5 0mm、1 8mm1 8 0mm或其他合适规格。2.1 3 无菌小玻管:3mm5 0mm。2.1 4 无菌接种环:1 0L(直径约3mm)、1L以及接种针。2.1 5 p H计或精密p H试纸。2.1 6 微生物生化鉴定系统。2.1 7 生物安全柜。3 培养基和试剂3.1 缓冲蛋白胨水(B PW):见A.1。3.2 四硫磺酸钠煌绿增菌液(T T B):见A.2。3.3 氯化镁孔雀绿大豆胨(R V S)增菌液:见A.3。3.4 亚硫酸铋(B S)琼脂:见A.4。3.5 HE琼脂:见A.5。3.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐(X L D)琼脂:见A.6。3.7 三糖铁(T S I)琼脂:见A.7。3.8 营养琼脂(NA):见A.8。1G B4 7 8 9.42 0 2 43.9 半固体琼脂:见A.9。3.1 0 蛋白胨水、靛基质试剂:见A.1 0。3.1 1 尿素琼脂(p H7.2):见A.1 1。3.1 2 氰化钾(K C N)培养基:见A.1 2。3.1 3 赖氨酸脱羧酶试验培养基:见A.1 3。3.1 4 糖发酵培养基:见A.1 4。3.1 5 邻硝基酚-D半乳糖苷(ON P G)培养基:见A.1 5。3.1 6 丙二酸钠培养基:见A.1 6。3.1 7 沙门氏菌显色培养基。3.1 8 沙门氏菌诊断血清。3.1 9 生化鉴定试剂盒。4 检验程序沙门氏菌检验程序见图1。2G B4 7 8 9.42 0 2 4图1 沙门氏菌检验程序5 操作步骤5.1 预增菌无菌操作取2 5g(m L)样品,置于盛有2 2 5m LB PW的无菌均质杯中,以80 0 0r/m i n 1 00 0 0r/m i n3G B4 7 8 9.42 0 2 4均质1m i n 2m i n,或置于盛有2 2 5m LB PW的无菌均质袋内,用拍击式均质器拍打1m i n2m i n。对于液态样品,也可置于盛有2 2 5 m LB PW的无菌锥形瓶或其他合适容器中振荡混匀。如需调节p H时,用1m o l/LN a OH或HC l调p H至6.80.2。无菌操作将样品转至5 0 0m L锥形瓶或其他合适容器内(如均质杯本身具有无孔盖或使用均质袋时,可不转移样品),置于3 61培养8h1 8h。对于乳粉,无菌操作称取2 5g样品,缓缓倾倒在广口瓶或均质袋内2 2 5m LB PW的液体表面,勿调节p H,也暂不混匀,室温静置6 0m i n 5m i n后再混匀,置于3 61培养1 6h1 8h。冷冻样品如需解冻,取样前在4 04 5的水浴中解冻不超过1 5m i n,或在28冰箱缓慢化冻不超过1 8h。5.2 选择性增菌轻轻摇动预增菌的培养物,移取0.1m L转种于1 0m LR V S中,混匀后于4 21培养1 8h2 4h。同时,另取1m L转种于1 0m LT T B中后混匀,低背景菌的样品(如深加工的预包装食品等)置于3 61培养1 8h2 4h,高背景菌的样品(如生鲜禽肉等)置于4 21培养1 8h2 4h。如有需要,可将预增菌的培养物在28冰箱保存不超过7 2h,再进行选择性增菌。5.3 分离振荡混匀选择性增菌的培养物后,用直径3mm的
