蝗虫微孢子虫Real-time PCR检测技术规范TZBXH 123-2025.pdf

《蝗虫微孢子虫Real-time PCR检测技术规范TZBXH 123-2025》讲解了针对蝗虫微孢子虫（Paranosema locustae）的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的技术流程与操作要求。该标准规定了利用Real-time PCR技术对蝗虫及其组织中微孢子虫进行快速、准确检测的技术规范，适用于蝗灾防控中病原体的分子生物学鉴定。标准详细描述了检测原理，即基于TaqMan探针法，在PCR扩增过程中通过荧光信号的累积实时监测靶基因扩增情况，结合Ct值判断样本是否携带微孢子虫。检测靶标为微孢子虫16S rRNA基因保守序列，并设计特异性引物和探针，探针5端标记6-FAM荧光基团，3端标记MGB淬灭基团，扩增时Taq酶水解探针释放可检测荧光，实现高灵敏度和高特异性检测。文中明确了结果判定标准：待测样品Ct值小于或等于阳性对照时判为检出，大于或等于阴性对照时判为未检出，并提供了荧光Ct值与拷贝数之间的回归方程（Y=-0.2665X+11.712，R=0.9994），用于定量分析。标准还涵盖了样品采集、运输与保存要求，强调在固定区域设置样地，采用扫网法标准化采集，使用无水乙醇固定并低温保存，确保DNA完整性。同时规定了阴性与阳性对照的设置、数据记录及档案管理制度，确保检测结果可追溯、可验证。附录部分补充了微孢子虫的分类地位、形态特征、生活史和传播方式，尤其是其通过水平传播（如摄食污染食物）和垂直传播感染宿主的机制，提升了标准的科学性和实用性。

《蝗虫微孢子虫Real-time PCR检测技术规范TZBXH 123-2025》适用于从事草原生态保护、农业植物保护、生物灾害防控及相关科研工作的单位与人员。主要包括各级植保站、草原生态保护机构、农业技术推广部门、病虫害监测站以及高校和科研院所中从事昆虫病理学、微生物防治和分子检测的研究人员。该标准特别适用于新疆维吾尔自治区内开展蝗虫生物防治与疫情监测工作的实践场景，可为蝗虫微孢子虫感染状况的精准诊断、生物杀虫剂应用效果评估以及生态风险预警提供技术支持。此外，实验室技术人员在进行昆虫病原微生物分子检测时，也可依据本标准规范操作流程，提升检测准确性与标准化水平，推动区域绿色防控技术的发展与应用。