流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南WST360-2024.pdf

ICS 11.020 CCS C 50 WS 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准 WS/T 3602024 代替 WS/T 3602011 流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南 Guideline for enumeration of peripheral blood lymphocyte subsets by flow cytometry 2024-04-02 发布 2024-09-01 实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 发 布 WS/T 3602024 I 前言 本标准为推荐性标准。本标准代替WS/T 3602011 流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南，与WS/T 3602011相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术内容变化如下：增加了流式细胞仪性能验证内容(见5.1)；完善了仪器质量控制和项目性能验证内容(见5.2、7.2.2)；梳理和保留了检验前、检验中、检验后过程的内容及要求(见第6、7、8章)；删减了标本采集和处理及临床意义内容（见2011年版的第4、10章）；增加了淋巴细胞亚群六色分析方案(见4.1.3、附录C)。本标准由国家卫生健康标准委员会临床检验标准专业委员会负责技术审查和技术咨询，由国家卫生健康委医疗管理服务指导中心负责协调性和格式审查，由国家卫生健康委员会医政司负责业务管理、法规司负责统筹管理。本标准起草单位：中国医学科学院肿瘤医院、北京医院/国家卫生健康委临床检验中心、北京大学第一医院、中国医学科学院北京协和医院、上海市交通大学医学院附属第一人民医院、上海交通大学医学院附属新华医院、上海长征医院、苏州大学附属第一医院/江苏省血液研究所。本标准主要起草人：崔巍、彭明婷、屈晨雪、黄春梅、李莉、沈立松、周琳、朱明清、崔婵娟、李臣宾。本标准于2011年首次发布，本次为第一次修订。WS/T 3602024 1 流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南 1 范围 本标准规定了流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群：T淋巴细胞（包括CD4+T细胞和CD8+T细胞）、B淋巴细胞和NK细胞的技术要求。本标准适用于医疗机构临床实验室开展流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。WS/T 806 临床血液与体液检验基本技术标准。3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。3.1 细胞分化抗原 cluster of differentiation；CD 不同谱系细胞在分化、发育、活化过程中，出现或消失的细胞表面标志。注1:细胞表面标志通常采用对应的单克隆抗体来识别。注2:已被命名的抗体有指定的CD编号，被特定抗体识别的特定抗原通常具有相同的编号。例如，被“抗CD1抗体”识别的抗原称为“CD1抗原”。3.2 前向散射光 forward scatter；FSC 光学检测器在入射光的正前方所收集的低角度散射光信号。注:FSC与细胞或颗粒的大小和折射指数有关。3.3 侧向散射光 side scatter；SSC 光学检测器在入射光的直角处所收集的细胞散射的光信号。注:SSC与细胞或颗粒的内部及表面结构复杂程度有关，如细胞质颗粒性、膜不规则性及核型等。3.4 设门 gating 在流式细胞图上基于一组参数来确定所要分析的目的细胞群，对该限定区域内的目的细胞群通过其他参数（如荧光参数）进一步分析其表达情况的过程。3.5 荧光强度 fluorescence intensity 结合到细胞或颗粒上的单克隆抗体荧光素多与少的量化指标。注1:在恰当的条件下，荧光强度与一个细胞或颗粒和特定荧光素相结合的位点数相关。即细胞或颗粒结合的荧光素越强意味着目标标记分子的数量越多，反之越少。荧光强度越强则荧光信号的通道值也越大，反之越小。WS/T 3602024 2 注2:荧光强度常通过相对荧光强度值的大小来表示，有算术平均荧光强度（mean fluorescence intensity，MFI）、几何平均（Geometric Mean）和中位荧光强度（Median fluorescence intensity，MdFI）3种计算方式。3.6 染色指数 staining index；SI 量化评估阳性与阴性细胞群的分离程度的指标。注1:SI通过阳性细胞群平均荧光强度（MFI）与阴性细胞群MFI的差，除以阴性细胞群荧光强度的2倍标准差计算而来SI=（MFI阳性群-MFI阴性群）/2rSD阴性细胞群，用于比较不同荧光染料在流式细胞术应用中荧光强度的差异。注2:SI越大，荧光强度越高。进行抗体滴度测定时需根据SI来确定最适合的抗体用量。3.7 荧光补偿