南美白对虾5种病原快速检测 重组酶聚合酶扩增微流控芯片法T∕ZJSC 0021-2025.pdf

《南美白对虾5种病原快速检测 重组酶聚合酶扩增微流控芯片法T∕ZJSC 0021-2025》讲解了针对南美白对虾五类高危病原体——急性肝胰腺坏死病致病弧菌（VAHPND）、白斑综合征病毒（WSSV）、传染性皮下及造血器官坏死病毒（IHHNV）、对虾十足目虹彩病毒（SHIV）和虾肝肠胞虫（EHP）——所建立的恒温、多重、集成化核酸检测方法。该标准描述了以重组酶聚合酶扩增（RPA）为核心，耦合微流控芯片平台的整套技术路径，涵盖检测原理、试剂与材料规格、仪器设备配置、标准化操作流程、结果判读依据及生物安全要求。标准明确了引物与探针设计原则、芯片结构参数（48通道离心式芯片、5μL/反应池）、冻干RPA试剂组分、荧光信号生成机制（FAM/BHQ1标记探针酶切释放荧光），以及内参对照、阴阳性对照的设置规范。其检测步骤覆盖样品采集、组织研磨、核酸提取、芯片加载、恒温扩增（39℃、20–30分钟）、荧光信号实时采集与阈值时间分析等关键环节，并规定了结果判定阈值（如Tt≤25min为阳性、无典型S型扩增曲线为阴性）、无效结果处理方式及污染防控措施。标准还系统引用了GB/T、SN/T、SC/T等20余项国家及行业规范，在实验室用水、生物安全、质量控制、诊断规程等方面实现技术协同，具备可操作性、可复现性和现场适用性基础。

《南美白对虾5种病原快速检测 重组酶聚合酶扩增微流控芯片法T∕ZJSC 0021-2025》适用于水产养殖企业疫病监测实验室、省级及地市级水生动物疫病预防控制中心、海关技术中心水生动物检疫实验室、高校与科研院所水生动物病害研究平台，以及第三方检测机构中从事对虾健康评估、苗种质量管控、流行病学调查和产地检疫的技术人员。该标准尤其适配基层渔业推广站、规模化对虾养殖场配备便携式微流控核酸检测仪的应用场景，可支撑养殖全过程（苗期筛查、养成期动态监测、出塘前检疫）中五类重大病原的同步、快速（单次检测≤40分钟）、低设备依赖（仅需恒温金属浴与芯片仪）识别。虽文本明确限定南美白对虾应用，但其技术框架（引物探针模块化设计、芯片多靶点固化策略、RPA恒温扩增体系）亦可为罗氏沼虾、克氏原螯虾等其他经济甲壳类动物的病原检测方法开发提供直接参考，对推动我国水产病害诊断由传统PCR向现场化、集成化、智能化升级具有实践指导价值。