动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程 琼脂稀释法NYT4143-2022.pdf

动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程琼脂稀释法22中华人民共和国农业行业标准备案号：XXXX-XXXX67.120.10CCS X41432022Technical code of practice of antimicrobial susceptibility tests for bacteria isolatedfrom animalsAgar dilution method中华人民共和国农业农村部发 布2022?07?11发布2022?10?01实施41432022NY?/T414320222?前?言本文件按照?标准化工作导则?第?部分?标准化文件的结构和起草规则?的规定起草?请注意本文件的某些内容可能涉及专利?本文件的发布机构不承担识别专利的责任?本文件由农业农村部畜牧兽医局提出?本文件由全国兽药残留与耐药性控制专家委员会归口?本文件起草单位?中国兽医药品监察所?中国动物卫生与流行病学中心?本文件主要起草人?张纯萍?王娟?赵琪?曲志娜?刘俊辉?黄秀梅?宋立?李月华?崔明全?张青青?徐士新?王鹤佳?刘娜?王君玮?动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程琼脂稀释法?范围本文件规定了动物源细菌对抗菌药物敏感性测试琼脂稀释法的操作步骤?结果判读?质量控制?记录及生物安全的要求?本文件适用于采用琼脂稀释法测定抗菌药物对动物源细菌的最小抑菌浓度?规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款?其中?注日期的引用文件?仅该日期对应的版本适用于本文件?不注日期的引用文件?其最新版本?包括所有的修改单?适用于本文件?分析实验室用水规格和实验方法?实验室?生物安全通用要求?术语和定义下列术语和定义适用于本文件?最小抑菌浓度?能抑制肉眼可见的细菌生长的最低抗菌药物浓度?菌落形成单位?在琼脂平板上经过一定温度和时间培养后形成的每一个菌落?试剂或材料?要求除另有规定外?所有试剂均为分析纯?水为符合?规定的三级水?培养基或按附录?配制或用商品化产品?试剂?氯化钠?抗菌药物?应选择标准品或对照品?具体种类见附录?中的表?和表?溶液配制?无菌生理盐水?取氯化钠?加水适量使溶解并稀释至?高压灭菌?抗菌药物非水溶剂?稀释剂?按照附录?中?的规定执行?培养基制备?阳离子调节?肉汤?按照?的规定执行?营养琼脂?按照?的规定执行?琼脂?按照?的规定执行?哥伦比亚血琼脂?按照?的规定执行?质控菌株?大肠埃希菌?用作肠杆菌科的质控菌?粪肠球菌?用作肠球菌属的质控菌?铜绿假单胞菌?用作铜绿假单胞菌的质控菌?金黄色葡萄球菌?用作葡萄球菌属的质控菌?空肠弯曲杆菌?用作弯曲杆菌的质控菌?肺炎链球菌?用作链球菌?巴氏杆菌的质控菌?材料?麦氏单位?标准比浊液?仪器设备?计?测量范围?精度?单位?恒温培养箱?培养箱?二级生物安全柜?超低温冰箱?或以下?点接种仪?比浊仪?精确度?麦氏单位?接种针?分析天平?感量?和?操作步骤?抗菌药物溶液制备?储备液取抗菌药物适量?精密称定?加水或其他适宜溶剂溶解并稀释?按照表?的规定执行?至浓度至少为?如?或为最高测试浓度的?倍以上?或以下保存?有效期半年?工作液取储备液?用?稀释至一定浓度?再倍比稀释至测试系列浓度?工作液浓度宜覆盖敏感性折点值?质控菌质控范围等?含药琼脂板的制备?琼脂?苛氧菌的培养基见附录?高压灭菌?冷却至?加抗菌药物系列工作液适量?混匀?倾注平板?厚度约?室温凝固?即形成系列稀释浓度的含药琼脂板?当天使用?或密封后冷藏?放置时间不超过?工作菌悬液的制备?两种方法任选其一?直接菌悬液法?取质控菌?测试菌单菌落?分别置于无菌生理盐水或无菌?中?用比浊仪或?麦氏单位标准比浊液调节菌液浓度至?麦氏单位?相当于?生长法?取质控菌?测试菌单菌落?分别置于加有?无菌?的试管中?培养?取菌液适量?用无菌生理盐水或无菌?调节菌液浓度至?麦氏单位?相当于?适用于菌落不易直接乳化而不能获得浓度均一菌悬液的细菌?注?工作菌悬液应在制备后?内完成接种?接种?取工作菌悬液?加入点接种仪小管中?根据点接种仪针孔大小选择?或?针孔?接种于?琼脂平板?同时以?为阴性对照?相应的工作菌悬液为阳性对照?针孔大小为?时?直接接种?工作菌悬液?针孔大小为?时?先将工作菌悬液用?稀释?倍?再接种?于琼脂平板?培养?培养?苛养菌的培养条件按附录?的规定执行?结果判读?阴性对照和阳性对照阴性对照应无菌生长?阳性对照在接种部位形成菌团或菌斑?否则?实验结果无效?质控菌株?范围根据抗菌药物的浓度及排布?以无菌生长的最低浓度为该药物的?质控菌株的?值应位于质控菌株的质控范围?见表?和表?内?否则?实验结果无效?测试菌株在符合?和?要求的前提下?与?同法判读?质量控制?质控菌株质控菌株可从?或参考实验室以及商业机构获得?保存其来源和传代等记录?以保证质