化妆品中他克莫司和吡美莫司的测定BJH 202301.doc

化 妆 品 补 充 检 验 方 法BJH 202301化妆品中他克莫司和吡美莫司的测定BJH2023-07-06 发布国 家 药 品 监 督 管 理 局发 布化妆品中他克莫司和吡美莫司的测定（BJH 202301）1 范围本方法规定了化妆品中他克莫司和吡美莫司的测定方法。本方法适用于膏霜乳类、液体（水、油）类化妆品中他克莫司和吡美莫司的定性和定量测定。2 方法提要样品经甲醇超声提取后，采用高效液相色谱仪分离，质谱检测器检测。根据保留时间和特征离子对丰度比定性，待测组分相对应离子峰面积定量，以标准曲线法计算含量。3 试剂与材料除另有规定外，本方法中所用试剂均为分析纯及以上规格，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。3.1 甲醇，色谱纯。3.2 乙酸铵，色谱纯。3.3 乙酸，色谱纯。3.4 含 0.1%乙酸-5mmol/L 乙酸铵的水溶液：准确称取 0.3854g 乙酸铵（3.2），加入 1.0mL乙酸（3.3），用水溶解并稀释至 1000mL，混匀。3.5 含 0.1%乙酸-5mmol/L 乙酸铵的甲醇溶液：准确称取 0.3854g 乙酸铵（3.2），加入 1.0mL乙酸（3.3），用甲醇（3.1）溶解并稀释至 1000mL，混匀。3.6 标准品：他克莫司、吡美莫司的标准品纯度均95.0%，标准品的中文名称、英文名称、CAS 号、分子式、相对分子质量、结构式见附录 A 中的表 A.1。3.7 标准储备溶液：称取他克莫司、吡美莫司标准品各 10mg（精确到 0.00001g），分别置于10mL 棕色容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并定容至刻度，混匀。制成标准储备溶液的质量浓度均为 1000mg/L。置于-18冰箱中保存。3.8 混合标准储备溶液：准确移取他克莫司、吡美莫司标准储备溶液（3.7）0.1mL 置于 10mL容量瓶中，用甲醇（3.1）稀释至刻度，摇匀。制成浓度为 10mg/L 的混合标准储备溶液。置于-18冰箱中保存。4 仪器与设备4.1 高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪。4.2 分析天平：感量 0.0001g 和 0.00001g。4.3 超声波清洗器。4.4 涡旋混合仪。4.5 高速离心机。5 试样制备与保存样品应按照标签标示的贮存条件进行保存。取样前，应检查封口的完整性，观察样品的性状和特征，并使样品混匀。打开包装后，应尽可能快地取出所要测定部分进行分析，取样后，应将样品进行密封保存。6 分析步骤6.1 筛查用混合标准溶液取混合标准储备溶液（3.8）适量，用甲醇（3.1）进行稀释，配制成他克莫司、吡美莫司浓度为 1.0g/L 的筛查用混合标准溶液。6.2 空白基质提取液称取空白试样 0.2g（精确到 0.0001g），置于 10mL 具塞比色管中，自“加入 8mL 甲醇”起与样品同法处理（6.5），作为空白基质提取液。6.3 基质混合标准中间溶液准确量取混合标准储备溶液（3.8）0.1mL 置于 10mL 容量瓶中，用空白基质提取液（6.2）稀释至刻度，摇匀，制成他克莫司、吡美莫司浓度为 100g/L 的基质混合标准中间溶液。6.4 基质混合标准系列溶液分别精密量取基质混合标准中间溶液（6.3）适量，用空白基质提取液（6.2）配制浓度为 0.5、1.0、2.0、5.0、20、50g/L 的基质混合标准系列溶液。基质混合标准系列溶液应现用现配。6.5 样品处理称取混合均匀的试样约 0.2g（精确至 0.0001g）于 10mL 具塞比色管中，加入 8mL 甲醇（3.1），于涡旋混合仪上振荡 30s 至试样与提取溶剂混合均匀。超声提取 15min，静置至室温，然后用甲醇（3.1）定容至刻度，摇匀，以 4000 r/min 离心 5min，上清液经 0.22 m滤膜滤过，滤液作为供试品溶液备用（供试品溶液可根据实际浓度进行适当稀释）。6.6 仪器参考条件6.6.1 色谱条件色谱柱：C18柱（2.1mm100mm，1.7m），或等效色谱柱；流动相：A 为含 0.1%乙酸-5mmol/L 乙酸铵的水溶液，B 为含 0.1%乙酸-5mmol/L 乙酸铵的甲醇溶液。梯度洗脱程序见表 1。流速：0.3mL/min；柱温：45；进样量：2L。表 1 梯度洗脱程序时间（min）流动相 A(%)流动相 B(%)0.0070300.5070303.0030708.0029811.0029811.30703015.0070306.6.2 质谱条件离子源：电喷雾离子源（ESI 源）；监测模式：正离子多反应监测模式（MRM），监测离子对及相关参数设定见表 2。表 2 他克莫司、吡美莫司监测离子对及相关参数设定组分名称母离子（m/z）子离子（m/z）CE（eV）他克莫司821.6768.6*20576.427吡美莫司827.6774.6*2