蜜蜂人工授精技术规程DB12T1284-2023.pdf

ICS 65.020.30 CCS B 47 12 天津市地方标准 DB12/T 12842023 蜜蜂人工授精技术规程 Technical regulations for artificial insemination of bees 2023-12-14 发布 2024-01-15 实施 天津市市场监督管理委员会 发 布 DB12/T 12842023 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由天津市农业农村委员会提出并归口。本文件起草单位：天津市正达蜂业有限公司、天津市农业发展服务中心、西青区农业农村发展服务中心。本文件主要起草人：李泽青、许继明、于海霞、王永颖、陈荣荣、唐佩娟、刘群、耿建颖。DB12/T 12842023 1 蜜蜂人工授精技术规程 1 范围 本文件规定了蜜蜂人工授精的设备要求、环境要求以及操作要求等技术要求。本文件适用于蜜蜂的人工繁殖。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GBT 41227-2021 蜜蜂饲养管理技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 蜜蜂人工授精 artificial insemination of bees 通过器械装置把雄蜂精液注射入蜂王体内使其受精。4 设备要求 仪器设备 4.1 蜂王人工授精仪、电子天平、显微镜、血球计数板、酸度计、离心机、紫外线灭菌灯、高压灭菌锅、医用方盘、手术剪刀、镊子、混精设备等。人工授精设备附件 4.2 4.2.1 背钩、腹钩、探针 打开蜂王背腹板及阴道的附件，均是用（1mm2mm）不锈钢丝手工制作而成。4.2.2 精液注射器 使用100l微量进样器。微量进样器的管身是有机玻璃材料加工而成的，推杆、针座、针头均为不锈钢材质。4.2.3 授精针头 针头的外径不大于0.3mm，内径不小于0.17mm。4.2.4 二氧化碳麻醉系统 由CO2钢瓶、胶管、气体洗瓶、蜂王固定器构成。蜂王固定器由诱入管、通气活塞、麻醉管和固定底座构成。DB12/T 12842023 2 人工授精试剂 4.3 4.3.1 常用试剂 75%酒精、灭菌蒸馏水、煤酚皂溶液、氯化钾、2羟基-柠檬酸三钠、对氨基苯磺酰胺、碳酸氢钠等。4.3.2 精子稀释保护液配制 2-羟基柠檬酸三钠2.43g；碳酸氢钠：0.21g；氯化钾：0.04g；对氨基苯磺酰胺：0.30g；D-葡萄糖0.30g，蒸馏水定容至100ml。加热灭菌时，温度不超过90。5 环境要求 地面用5%的煤酚皂溶液喷洒消毒，台面用75%的酒精擦拭，空间用紫外线灯灭菌15min。金属及耐高温的器械和附件用消毒锅煮沸灭菌1520min，不耐高温的器械用75%酒精擦拭或灌洗灭菌。塑料注射器及授精针头等用酒精消毒灭菌后，再用无菌蒸馏水冲洗45次。6 操作要求 前期准备 6.1 6.1.1 精子活力检查 选用优质雄蜂的精液，采集精液的雄蜂应符合GBT 41227-2021的要求。取1ul新鲜雄蜂精液置于凹玻片上，使用精子稀释保护液进行20倍稀释，放上盖玻片，在显微镜下观察精子活力。运动的精子数占精子总数的60%以上方可使用。6.1.2 处女蜂王的麻醉 选取优质处女蜂王，蜂王的选择应符合GBT 41227-2021 的要求。将蜂王装入麻醉室后，通过调节阀门以每秒钟流出约5个气泡为宜，等待足须不动时停止麻醉。操作要求 6.2 6.2.1 拉开螫针腔 蜂王麻醉的同时，调节显微镜的位置及焦距，使处女蜂王的腹部清晰地呈现在视野中央。移动背腹钩操纵杆,使背腹钩在探针配合下,分别钩住背腹板顶端的中央位置,并向外侧拉动背腹板,使其间距为34mm,然后再移动背钩,使其“膨大”部分嵌入到螫针腔基部的三角缝内,再次移动背腹钩纵杆,把背腹板间距拉至56mm。6.2.2 进针注射 6.2.2.1 螫针腔打开后,调整蜂王和针头的角度,使蜂王的纵轴线与注射器纵轴平行，其纵轴线与垂直线的夹角约 30 度左右，排除针头尖中的生理液和气泡后,使针尖接近阴道口,用探针压住瓣突,将针尖徐徐推入阴道,直至中部输卵管,取出探针,将精液慢慢注入。6.2.2.2 一次性授精通常注入 8l 精液;两次性授精,每次各注 45l 精液,其间隔 2448h。授精完毕,1015s 后退出针头,卸下麻醉管，小心退出蜂王，给蜂王作上标记，待苏醒后送回原蜂群。