发酵罐安全操作流程.docx

发酵罐安全操作流程一、准备工作1、检查蒸汽发生器，确保已开启；2、检查空气源，保证供气压力在 0.40.7MPa 之间，相对湿度应小于 60%；再调节空气减压阀，使其出口压力在0.20.25MPa 之间；3、检查各管道、阀门是否有泄漏，进料口、补料口硅胶垫是否需要更换，如有请及时修整；4、检查各压力表是否归零，不能归零的予以更换；5、检查罐内是否清洗干净；6、查看控制系统、传动系统是否良好；7、检查完毕进行打压试漏：压力 0.15MPa 保持 30min，如果出现压力下降，请用肥皂水查找泄漏点，并进行修复；8、安装已标定的 PH 电极、溶氧电极等其他检测设备，确保已安装到位、螺母旋紧；9、检查一切无问题，如实填写记录并签字；二、空气过滤器消毒1、首先关闭空气过滤器前的进蒸汽阀，缓慢卸掉空气过滤器内压力；2、打开蒸汽过滤器下端的排污阀（排净冷凝水后微开），缓缓开启蒸汽阀，排净管道内冷凝水后调整蒸汽阀大小，保证蒸汽压力 0.2MPa 以上；3、打开空气过滤器下端的排污阀，慢慢打开过滤器前的蒸汽阀，待排尽冷凝水后排污阀微开；4、开启过滤器后的排气阀门，通过调整其与蒸汽阀的大小，维持压力 0.120.14MPa 消毒 30min；5、消毒结束调小排气阀与排污阀的开度，迅速关闭蒸汽阀同时打开进空气阀（换气过程中保证压力不掉零），调整空气阀大小保持压力在 0.080.1MPa，以便吹干空气过滤器；6、约 2030min 过滤器吹干后（过滤器外壁温度降至常温，手试吹出的空气干燥、细腻、滑润），关闭过滤器下端的排污阀及排气阀，保持正压；三、罐空消1、首先打开夹套下端的排水阀，排尽夹套中的水；2、依次打开取样阀、蒸汽阀，排尽管道内冷凝水后将取样阀转为微开；稍开罐排气阀，再缓慢开启罐底隔膜阀使蒸汽徐徐进入发酵罐；3、在灭菌过程中时刻注意并控制罐压在 0.110.12MPa 内，罐压的控制通过蒸汽阀和排气阀来实现；4、空消 3050min 后，关闭蒸汽阀和罐底隔膜阀，关闭后压力会迅速下降，为防止罐内产生负压，需将进空气阀打开，维持罐压 0.030.05MPa 或者压力下降至零时将排气阀打开自然冷却；待温度降至 80以下时排尽罐内冷凝水；四、实消1、将标定好的 PH 电极、溶氧电极等检测设备安装，检查确保安装到位，旋紧螺母；2、关闭罐底隔膜阀，微通风、开低转速，按工艺要求将配制好的培养基加入罐内，检查无漏加原料后将加料口螺母适度拧紧；3、打开夹套排水阀，排尽夹层水；关闭夹套进出水阀门；缓慢打开夹套进蒸汽阀（打开过快夹层容易产生异响）进行预热，保证夹层压力小于 0.1MPa；4、待罐内温度达到 90以上（某些培养基在 7090时容易起泡沫，注意观察）时关闭夹套蒸汽阀；5、关闭搅拌、通风，排气阀微开；依次打开取样阀、蒸汽阀，排尽管道内冷凝水后将取样阀转为微开，打开罐底隔膜阀，将蒸汽缓缓通入罐内（注意料液翻滚）；再打开进风管道上的蒸汽阀门，通过控制罐底隔膜阀、风管蒸汽阀、排气阀调节罐压至 0.110.12MPa，维持 121灭菌 30min（加料口、补料口等均稍微排气，以彻底消除死角，时刻注意罐压）；6、灭菌过程中校正溶氧电极零点，30min 灭菌完毕后，依次关闭加料口、补料口、罐底隔膜阀、风管蒸汽阀；关闭夹套排水阀，打开循环进出水阀（变换要迅速，时刻注意罐压变化，防掉零）；此时在控制柜中找到对应罐，开启“冷却手动”和“转速”按键，开始冷却降温；7、降温时罐压将迅速下降，当降至 0.05MPa 时开启风管进气阀，随时保持压力在 0.05MPa；五、无菌接种1、当料液温度降至工艺要求时，按照工艺要求将转速、通风量调至最大，并维持罐压稳定几分钟后，标定溶氧电极满度；2、用酒精棉擦拭接种口和接种者双手，火圈加入酒精套在接种口上，关闭搅拌转速，降低通风量，维持罐压在0.010.02MPa（不能掉零，否则容易引起污染），点燃火圈，用工具扳手缓慢拧下接种口螺母（快速开启，容易出现危险），螺母不能离开火焰；3、接种者将菌种瓶口在火焰上稍微烧一会儿，拔下瓶塞迅速将菌种倒入罐内；4、拧紧接种口螺母，熄灭火焰，并用酒精棉将接种口擦拭干净；按工艺要求调好转速、通风量、罐压，并点击“开始发酵”按键开始计时培养；六、取样操作关闭蒸汽阀、全开取样阀，开启罐底隔膜阀进行取样；取样完毕后微开取样阀和蒸汽阀，用少量蒸汽进行封口，保持无菌状态；七、罐的清洗1、发酵罐在使用前和使用后要及时清洗干净；打开两边清洗口，用水管清洗余料，若不能清洗干净则需拆开罐盖；2、拆洗前首先关闭电源，拧开周边螺丝，两人小心地同时将罐盖垂直向上取出（注意：请不要抓传动轴，以免影响机械密封和轴的传动稳定性），水平放置平整的地面上，并防止滚动；3、彻底清洗干净后，将罐盖按原位轻轻放入发酵罐内，拧上周边螺丝（注意：对角拧