饲料添加剂角蛋白酶活力的测定分光光度法NYT4362-2023.pdf

2023?04?11发布2023?08?01实施饲料添加剂角蛋白酶活力的测定分光光度法46中华人民共和国农业行业标准备案号：XXXX-XXXX65.120CCS B43622023Feed additivesDetermination of keratinase activitySpectrophotometric method中华人民共和国农业农村部发 布N Y/T 前言本文件按照G B/T 标准化工作导则第部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由农业农村部畜牧兽医局提出.本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(S A C/T C)归口.本文件起草单位:中国农业科学院饲料研究所、山东隆科特酶制剂有限公司、福建傲农生物科技集团股份有限公司、广州立达尔生物科技股份有限公司.本文件主要起草人:丁宏标、钱娟娟、侯玉煌、周盛昌、陶正国、李习龙、刘胜利.N Y/T 饲料添加剂角蛋白酶活力的测定分光光度法范围本文件描述了饲料添加剂角蛋白酶活力的分光光度测定方法.本文件适用于饲料添加剂角蛋白酶产品中酶活力的测定.本文件的方法定量限为 U/g(U/m L).规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.G B 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定G B/T 分析实验室用水规格和试验方法G B/T 动物饲料试样的制备术语和定义下列术语和定义适用于本文件.角蛋白酶k e r a t i n a s e产自地衣芽孢杆菌,可以降解羽毛等动植物角蛋白生成氨基酸或肽类的蛋白酶.角蛋白酶活力单位k e r a t i n a s ea c t i v i t yu n i t在、p H 的条件下,水解酪蛋白,每分钟产生g的酪氨酸的酶量为一个酶活力单位.注:单位为U.原理在一定的温度和p H条件下,角蛋白酶水解酪蛋白底物产生含有酚基和吲哚基的氨基酸,用三氯乙酸沉淀后,在碱性条件下,将福林试剂还原,生成磷钨钼酸,在 n m有最大吸收,其颜色的深浅与酚基氨基酸含量成正比.采用分光光度法测定反应液吸光值,计算角蛋白酶活力.试剂或材料除非另有说明,仅使用分析纯试剂.水:G B/T ,三级.碳酸钠溶液(m o l/L):称取无水碳酸钠(N aC O)g,用水溶解并定容至 m L,混匀.三氯乙酸溶液(m o l/L):称取三氯乙酸 g,用水溶解并定容至 m L,混匀.盐酸溶液(m o l/L):取浓盐酸 m L,加水稀释并定容至 m L,混匀.盐酸溶液(m o l/L):取 m Lm o l/L盐酸溶液(),定容至 m L,混匀.氢氧化钠溶液(m o l/L):取氢氧化钠 g,用水溶解,冷却至室温后定容至 m L,混匀.福林(F o l i n)试剂:于 m L磨口回流装置中加入钨酸钠(N aWO HO)g、钼酸钠(N aM o O HO)g、水 m L、磷酸 m L、浓盐酸 m L.小火沸腾回流 h,取下回流N Y/T 冷却器,在通风橱中加入硫酸锂 g、水 m L和数滴浓溴水(),再微沸 m i n,以除去多余的溴(冷却后仍有绿色需再加溴水,再煮沸除去过量的溴),冷却后加水定容至 m L.混匀、过滤.试剂应呈金黄色,储存于棕色瓶内.或购买市售的福林试剂.福林工作溶液:以份福林试剂与份水混匀.硼酸钠溶液:称取 g硼酸钠(硼砂),加水溶解并定容至 m L,混匀.硼酸溶液:称取 g硼酸,加水溶解并定容至 m L,混匀.硼酸缓冲溶液(p H ):取 m L硼酸钠溶液(),用硼酸溶液()将p H调至 ,备用.酪蛋白溶液(p H ):准确称取酪蛋白(C A S号:,上海国药 或阿拉丁C )g,精确至 g,先用少量 m L氢氧化钠溶液()湿润后,再加入p H 硼酸缓冲溶液()约 m L,在沸水浴中或磁力搅拌器上边加热边搅拌直至完全溶解.冷却后,用 m o l/L盐酸溶液()或 m o l/L氢氧化钠溶液(),将p H调至 ,并转入 m L容量瓶中,用p H 硼酸缓冲溶液()定容至刻度.储存,有效期为d.)上海国药 或阿拉丁C 是商品名,给出这一信息是为了给本文件的使用者一个相对标准,并不表示对该产品的认可.如果其他产品能有相同的效果,则可使用这些等效的产品.L 酪氨酸标准储备溶液(m g/m L):准确称取预先于 干燥h烘至恒重的L 酪氨酸标准物质(C A S号:,纯度)g,精确至 g,用 m Lm o l/L盐酸溶液()溶解后,再用水定容至 m L,混匀.储存,有效期为d.L 酪氨酸标准工作溶液(g/m L):准确吸取 m Lm g/m LL 酪氨