牛、羊产气荚膜梭菌病荧光定量PCR诊断技术DB15T4230-2025.pdf

《牛、羊产气荚膜梭菌病荧光定量PCR诊断技术》讲解了针对牛、羊由产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens, CP）引发的急性、致死性传染病的科学诊断方法。该标准系统性地规范了疾病的临床诊断、样品采集与保存要求，并重点阐述了荧光定量PCR（qPCR）在病原定种和分型鉴定中的具体应用流程。文件明确指出适用范围为牛和羊产气荚膜梭菌病的实验室检测，依据NY/T 3073进行临床初步判断，样品采集须遵循GB 19489和NY/T 541的安全与技术规范。在检测环节，标准详细列出了所需的仪器设备，包括生物安全柜、核酸提取仪、荧光定量PCR仪等关键装置，以及无酶耗材、商品化试剂盒、引物探针配置浓度等材料要求。检测流程涵盖样品处理、DNA提取、反应体系配制和扩增程序设置，其中定种检测使用特定引物和探针，在25μL体系下运行95℃预变性5分钟，随后45个循环的扩增程序，依据Ct值判定结果：Ct≤35为阳性，≥40为阴性，35至40之间且有扩增曲线需复检。此外，标准还建立了多重qPCR分型鉴定方法，能够对A-G七种主要毒素基因型进行同步检测，提升了病原体分型效率与精准度，阳性对照采用含目标片段的重组质粒，确保检测特异性与灵敏度。整个检测过程强调对照设置的严谨性和实验条件的标准化，以保障结果准确可靠。

《牛、羊产气荚膜梭菌病荧光定量PCR诊断技术》适用于动物疫病防控机构、兽医诊断实验室、畜牧养殖企业疫病监测部门及相关科研院所的专业技术人员。本标准特别适用于从事牛羊细菌性疫病检测、病原分子生物学研究、疫苗开发与质量控制的从业人员。同时，该技术规程也适合地方动物卫生监督单位、基层防疫队伍在开展重大疫病排查、疫情预警和流行病学调查时作为权威检测依据。对于具备荧光定量PCR实验平台并符合生物安全二级（BSL-2）要求的实验室，该标准具有高度的操作指导意义，可用于提升产气荚膜梭菌感染的早期诊断能力和分型水平，进而支持临床防治决策与动物健康管理。此外，该标准还可作为相关农业高等院校教学与培训的技术参考文件。