梅花鹿胚胎移植技术规程DB11T960-2013.pdf

ICS 65.020.30 B 44 备案号:36785-2013 DB11 北京市地方标准 DB11/T 9602013 梅花鹿胚胎移植技术规程 Code of practice on embryo transfer in the sika deer 2013-01-31 发布 2013-05-01 实施 北京市质量技术监督局 发 布 DB11/T 9602013 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 术语和定义.1 3 供体鹿选择、超数排卵及配种.2 4 手术法冲胚.2 5 胚胎质量鉴定.3 6 受体鹿移植.3 7 记录.4 附录 A（资料性附录）梅花鹿胚胎移植记录表.5 DB11/T 9602013 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由北京市农业局提出。本标准由北京市农业标准化技术委员会归口。本标准由北京市农业局负责组织实施。本标准起草单位：北京市畜牧兽医总站、中国农业大学。本标准主要起草人：刘国世、蒋益民、薛水玲、王俊、史文清、朱士恩、云鹏、王梁、薛振华、任康、赵广华、商业、张鲁。DB11/T 9602013 1 梅花鹿胚胎移植技术规程 1 范围 本标准规定了供体鹿选择、超数排卵及配种、手术法冲胚、胚胎质量鉴定、受体鹿移植方法和记录。本标准适用于梅花鹿的胚胎生产和移植。2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。2.1 供体鹿 donor 在胚胎移植过程中提供胚胎的母鹿个体。2.2 受体鹿 recipient 在胚胎移植过程中接受胚胎的母鹿个体。2.3 试情公鹿 teaster deer 用于母鹿发情鉴定,输精管结扎的公鹿。2.4 超数排卵 multiple ovulation 在母畜发情周期的适当时间，应用外源促性腺激素处理，使卵巢比自然发情时有更多的卵泡发育并排卵，也简称为“超排”。2.5 阴道栓 vaginal suppository 一种内含孕酮、用特制的放置器将其放入阴道的同期发情装置。2.6 胚胎移植 embryo transfer 将体内、外生产的哺乳动物早期胚胎，移植到另一头同种的生理状态相同或相似的雌性动物生殖道内，使之继续发育成为新个体的技术。DB11/T 9602013 2 3 供体鹿选择、超数排卵及配种 3.1 供体鹿选择 体况良好、生殖机能正常，系谱完整、有种用价值且年龄在35周岁的成年母鹿。3.2 超数排卵 放置阴道栓（当天记为第0天）后第9天开始注射促卵泡素（FSH），每天注射两次间隔12h，早晚各1次，4天8次等量或减量注射。到第1213天结束，共注射FSH 320mg。第7次注射FSH时取出阴道栓。3.3 发情鉴定 阴道栓取出后24小时开始用试情公鹿每隔6h试情一次，每次持续0.5h1h。母鹿稳定接受爬跨即为发情。3.4 配种 供体鹿发情后8h12h麻醉，直肠把握人工授精配种。间隔8h12h重复输精一次。每次输精冻精剂量为2支/头（每支冻精的有效精子数在1000万以上）。4 手术法冲胚 4.1 冲胚器材、药品及试剂 4.1.1 器材 套管针、冲胚管、注射器、肠钳夹、培养皿、手术刀、手术缝合针和缝合线、体式显微镜、恒温板等。4.1.2 药品及试剂 含0.3%胎牛血清的磷酸缓冲液（PBS）、胚胎保存液（Holding液）、青霉素、链霉素、石蜡油、麻醉药、解麻药等。4.2 冲胚 4.2.1 术前准备 供体母鹿第一次配种后6d7d手术法冲胚，母鹿术前禁食24h。4.2.2 麻醉与保定 术前进行全身麻醉。冲胚时将母鹿放于保定架，呈前低后高仰卧保定。4.2.3 术部消毒 术部位于腹部中线距乳房约4cm处。麻醉后的母鹿术部备皮，用温水清洗，5%碘酊和75%酒精消毒。4.2.4 手术方法 4.2.4.1 冲胚在冲胚室内进行。DB11/T 9602013 3 4.2.4.2 在腹部中线距乳房基部前约 4cm 处做一切口，然后将两侧子宫角和输卵管暴露，观察左右卵巢上的黄体发育情况并记录。4.2.4.3 在一侧子宫角基部用止血钳穿孔，插入冲胚管，由充气管注入 5ml 左右空气,使气囊封阻子宫腔；在子宫角和输卵管结合部的子宫角端插入套管针，拔出针芯，将装有 PBS 的 50ml 注射器接到套管针上，然后注入 3537的 PBS 30ml50ml，将胚胎从子宫角的上端冲出，由冲卵管的出液孔收集于培养皿（直径 90mm）中,放气后取下冲胚管。4.2.4.4 用同样方法冲取另一侧子宫角的胚胎。4.2.4.5 冲胚完成后将子宫角放回体内，并用 0.9%的生理盐水进行冲洗,并注入 2ml 石蜡油以防止生殖道粘连。4.2.5 缝合与消毒 左右子宫角创口各缝1针,腹膜和肌肉层连续缝合，皮肤结结缝合，用5%碘酊消毒。术后3天内每天注射2次青霉素、链霉素等抗生素。5 胚胎质量鉴定 5.