食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定GB 5009.299-2024.pdf

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B5 0 0 9.2 9 92 0 2 4食品安全国家标准食品中乳铁蛋白的测定2 0 2 4-0 2-0 8发布2 0 2 4-0 8-0 8实施中华人民共和国国家卫生健康委员会国 家 市 场 监 督 管 理 总 局发 布食品安全国家标准食品中乳铁蛋白的测定1 范围本标准规定了食品中乳铁蛋白的高效液相色谱测定方法。本标准适用于巴氏杀菌乳、调制乳、含乳饮料、调制乳粉及乳基婴幼儿配方食品中牛乳铁蛋白含量的测定。本标准不适用于风味发酵乳、豆基婴幼儿配方食品中牛乳铁蛋白的测定。2 原理试样中的牛乳铁蛋白经磷酸盐缓冲液提取,肝素亲和柱富集净化后,反相高效液相色谱柱分离,紫外检测器于2 8 0n m处检测,外标法定量。3 试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6 6 8 2规定的一级水。3.1 试剂3.1.1 乙腈(CH3C N):色谱纯。3.1.2 三氟乙酸(C F3C O2H):色谱纯。3.1.3 氯化钠(N a C l)。3.1.4 磷酸(H3P O4)。3.1.5 磷酸氢二钠(N a2H P O4)。3.2 试剂配制3.2.1 磷酸盐缓冲液:称取7.1g磷酸氢二钠、5 8.4g氯化钠,加9 0 0m L水溶解,用磷酸调p H至8.00.2,加水定容至10 0 0m L,临用现配。3.2.2 磷酸盐缓冲液:称取2 8.4g磷酸氢二钠,加9 0 0m L水溶解,用磷酸调p H至7.50.2,加水定容至10 0 0m L,临用现配。3.2.3 0.1%三氟乙酸溶液:量取1m L三氟乙酸注入9 0 0m L水中,用水稀释至10 0 0m L,过0.4 5m滤膜。3.3 标准品牛乳铁蛋白标准品(C A S号:1 4 6 8 9 7-6 8-9):纯度9 5%,铁含量3 5m g/1 0 0g,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。注:标准品可以使用满足溯源要求的商品化标准溶液。3.4 标准溶液配制3.4.1 牛乳铁蛋白标准储备溶液(5.0m g/m L):称取5 0m g(精确至0.1m g)牛乳铁蛋白标准品用水溶解,转移至1 0m L容量瓶并定容至刻度,混匀,04条件下保存,可保存3个月。3.4.2 牛乳铁蛋白标准中间溶液(0.5 0m g/m L):吸取1.0m L牛乳铁蛋白标准储备溶液,用磷酸盐缓1G B5 0 0 9.2 9 92 0 2 4冲液定容至1 0m L,临用现配。3.4.3 牛乳铁蛋白标准系列工作溶液:准确移取上述牛乳铁蛋白标准中间溶液,用磷酸盐缓冲液稀释定容,配 制 成 浓 度 分 别 为1.0g/m L、5.0g/m L、1 0.0g/m L、5 0.0g/m L、1 0 0.0g/m L和2 0 0.0g/m L的标准系列工作液,临用现配。3.5 材料3.5.1 肝素亲和柱:1m L,柱容量2m g,或性能相当者(验证方法见附录B)。注:使用不同厂商的肝素亲和柱,在样品提取、上样、淋洗和洗脱的操作方面可能会略有不同,应根据肝素亲和柱特点进行优化。3.5.2 滤膜,水相,0.4 5m。3.5.3 水相针头滤器:聚醚砜材质,0.4 5m。4 仪器和设备4.1 高效液相色谱仪:配有紫外检测器或相当者。4.2 天平:感量分别为0.0 1g和0.1m g。4.3 冷冻离心机:4,转速1 00 0 0r/m i n。4.4 p H计:精度为0.0 1。4.5 涡旋振荡器。4.6 恒温水浴锅。4.7 固相萃取柱装置。5 分析步骤5.1 样品前处理5.1.1 试样制备取有代表性的样品至少2 0 0g,液态样品摇匀后储存于容器中作为试样,于04 保存,备用;固态样品混匀后储存于容器中作为试样,常温下干燥保存,备用。5.1.2 试样提取5.1.2.1 液态试样(巴氏杀菌乳、调制乳、含乳饮料)称取5g(精确至0.0 1g)试样于烧杯中,加入适量磷酸盐缓冲液提取,分次将样品转移至2 5m L容量瓶,用磷酸盐缓冲液定容至刻度,充分混匀后转入离心管,在4 条件下1 00 0 0r/m i n离心8m i n,取样液待净化。5.1.2.2 固态试样(调制乳粉、乳基婴幼儿配方食品)称取1g 5g(精确至0.0 1g)试样于烧杯中,加入温热(温度不超过5 0)的磷酸盐缓冲液,搅拌使样品溶解,冷却至室温,分次将样品转移至5 0m L容量瓶并用磷酸盐缓冲液定容至刻度,充分混匀后转入离心管中,取4 0.0m L溶液在4条件下1 00 0 0r/m i n离心8m i n,取样液待净化。5.1.3 试样净化肝素亲和柱使用前先加入5.0m L磷酸盐缓冲液活化。准确移取1 0.0m L上述样液过柱,控制流速在1m L/m i n3m L/m i n,待样液滴完后,用1 0.0m L磷酸盐